Responsable de l'équipe d'accueil

Zanier
Katia
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0368854406

Personne encadrant le stage

Zanier
Katia
0368854406

Lieu du stage

Biotechnologie et signalisation cellulaire (UMR 7242)
Pôle Api - ESBS
300, bld. Sébastien Brandt
CS 10413
F-67412 Illkirch-Cedex

Sujet du stage

Régulation de la voie de signalisation de p53 par la kinase IKKβ
Le suppresseur de tumeur p53 est un facteur de transcription inactivé dans 50% des cancers humains suite à des mutations du gène TP53. Les protéines p63 et p73 appartiennent à la même famille de protéines que p53 et sont considérées comme des homologues fonctionnels de p53. Dans les tumeurs, p63 et p73 sont exprimées sous forme d’isoformes oncogéniques (ΔNp63 et ΔNp73) dépourvues du domaine de transactivation N-terminal et agissent comme inhibiteurs négatifs dominants des protéines de séquence intacte.
Ce projet porte sur la régulation des protéines de la famille p53 par la sous-unité β de la kinase IKK (inhibitor of κB kinase), impliquée dans les réponses inflammatoires, immunitaires et apoptotiques. Il est connu que IKKβ phosphoryle p53, p73 et ΔNp73α. En particulier, la phosphorylation de ΔNp73α par IKKβ favorise l'accumulation nucléaire de cet isoforme, ce qui conduit à l’inhibition de la transcription p53-dépendante.
L'objectif de ce projet est de caractériser les interactions de IKKβ avec les membres de la famille p53. À cette fin, nous avons déjà mis en place des protocoles pour l'expression sous forme recombinante et la purification de plusieurs constructions des protéines IKKβ, p53 et p73/ΔNp73α. Au cours de ce stage, nous utiliserons des techniques biophysiques et biochimiques afin d'identifier les régions minimales impliquées dans les interactions de IKKβ avec p53 et p73/ΔNp73α. De plus, nous allons réaliser des expériences d'activité de kinase dans le but de caractériser les contributions des régions identifiées vis-à-vis de la spécificité de la phosphorylation.
Les résultats obtenus serviront de base pour la conception des complexes protéine-protéine pour des études structurales. Au cours du stage, le candidat développera des expertises dans l’expression et la purification des protéines, dans des techniques de biologie moléculaire (Western Blotting) et dans une gamme de méthodes in vitro pour l’analyse des interactions protéine-protéine (y compris des expériences de pulldown, la spectroscopie RMN et la titration calorimétrique isotherme (ITC)). En outre, il/elle acquérra de l'expérience dans la réalisation et l'analyse des expériences de cinétique enzymatique.