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Poterszman
Arnaud
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Personne encadrant le stage

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Lieu du stage

IGBMC

Sujet du stage

Etude structurale et fonctionnelle de complexes de réparation de l’ADN par excision-resynthèse de nucleotides.
Mots-clés : cryo-microscopie, assemblages multi-protéiques, biologie structurale

Contexte : L’ADN est fréquemment exposé à l’action d’évènements génotoxiques, que ce soit par des agents exogènes comme les radiations ionisantes, des molécules mutagènes ou par le métabolisme cellulaire. Différentes mécanismes cellulaires permettent l’élimination et la réparation de ces lésions. Nous travaillons sur la voie de réparation par excision-resynthèse des nucléotides (NER), plus précisément sur le facteur TFIIH, un complexe multi-protéique composé de 10 sous-unités impliqué non seulement dans la voie NER mais également dans l’initiation de la transcription et sa régulation. Impliqué dans de nombreuses voies métaboliques, il interagit avec de multiples partenaires dont les acteurs de la transcription basale et activée ainsi que des facteurs de réparation de la voie NER dont le complexe de reconnaissance de la lésion XPC/HR23B ou l’endonucléase XPG.

Projet : Les travaux porteront sur la caractérisation de complexes de réparation impliquant un fragment d'ADN endommagé, les protéines de reconnaissance des lésions XPC/HR23B et le facteur TFIIH. Un premier volet sera consacré essentiellement à l'expression en quantité suffisante des complexes protéiques impliqués et à la production d'un ADN substrat portant un dommage. Dans une seconde phase, des études in vitro (tests fonctionnels, AUC, SAXS, EMSA, SPR, spectroscopies de fluorescence) seront réalisées pour optimiser l’assemblage de complexes stables impliquant TFIIH en vue d’études par cryo-microscopie électronique.

Techniques: Production et purification de complexes multi-protéiques (système d’expression baculovirus). Etude de protéines/complexes par des méthodes biochimiques (gel-retard, tests ATPase et hélicase…), biophysiques (gel-filtration, diffusion de lumière, ultracentrifugation analytique, spectrométrie de masse) et initiation à la cryo-microscopie.