Stage Master

Le co-activateur transcriptionnel SAGA contient 19 polypeptides différents pour une masse moléculaire supérieure à 1.6 MDa. Cette complexité traduit la diversité des fonctions associées à ce complexe in vivo : fonctions enzymatiques d’acétylation (HAT) ou de dé-ubiquitination des histones, fonctions d’interaction avec des activateurs de transcription, des facteurs généraux de transcription et des nucléosomes. Le complexe SAGA constitue ainsi une interface entre les activateurs de transcription qui reconnaissent des séquences spécifiques en amont du promoteur des gènes et les facteurs de transcription généraux tels que TBP. Afin de mieux comprendre le mode d’action de SAGA des données structurales sur des complexes fonctionnels sont indispensables. Le seul modèle structural disponible à ce jour a été obtenu dans le laboratoire d’accueil par microscopie électronique et plusieurs sous-unités ont été localisées par immunomarquage ce qui a permis de proposer un modèle pour l’architecture quaternaire de SAGA. Le projet de recherche se déclinera en trois parties :
1- Purification du facteur SAGA de levure. Un protocole de purification a été développé au laboratoire. Le stage comportera une introduction à la purification d’un complexe SAGA.
2- Détermination d’un modèle structural du coactivateur SAGA interagissant avec l'activateur de transcription Gal4-VP16. Des méthodes de microscopie électronique seront utilisées pour visualiser SAGA en coloration négative et en cryomicroscopie électronique. L’objectif est d’atteindre une résolution spatiale de l’ordre de 10 Å par l’analyse numérique d’un grand nombre d’images moléculaires.
3- Interaction avec TBP Le complexe SAGA interagit avec la sous-unité TBP impliqué dans l’initiation de la transcription. Un complexe stable entre TBP et SAGA été caractérisé et sera analysé par microscopie électronique et analyse d’image.