Stage Master

Les récepteurs nucléaires (RNs) représentent une famille de facteurs de transcription ligand-dépendants qui contiennent un domaine N-terminal variable, un domaine de liaison à l’ADN (DBD) bien conservé et un domaine de liaison au ligand (LBD). Plusieurs RNs jouent un rôle important dans la régulation du métabolisme et démontrent des effets anti-inflammatoires et régulateurs de l’immunité. C’est le cas du récepteur des glucocorticoïdes (GR) qui potentialise des voies anti-inflammatoires et bloque l’activité de facteurs de transcription clé de l’inflammation, tels qu’AP-1 et NF-κB. Malheureusement, les molécules anti-inflammatoires ciblant GR ont des effets secondaires néfastes sur le métabolisme. En particulier, ils présentent un risque de développement de diabète de type 2 et provoquent de l’hypertension et une atrophie musculaire. Le but du projet est la compréhension au niveau moléculaire des mécanismes de régulation de la transcription par GR par une approche de biologie structurale intégrative. Des études fonctionnelles seront tout d’abord effectuées, en collaboration, dans des tissus de souris par analyses cistromiques et transcriptomiques. Ces données fonctionnelles permettront de déterminer les gènes régulés par GR et d'autre part, l’identification de nouveaux partenaires tissue-spécifiques et cela fournira une base solide aux études structurales. Nous nous focaliserons sur la production et la purification de GR sous forme native, complète ou tronquée au niveau des différents domaines et des partenaires physiologiques. Puis, nous conduirons des études biophysiques et structurales des complexes associés à GR. La caractérisation biophysique sera faite en utilisant diverses techniques, telles que l’ultracentrifugation analytique et la diffusion de lumière. Des études de cryo microscopie électronique (cryo EM) seront entreprises permettant la reconstruction tridimensionnelle des complexes et l’analyse de leur topologie globale. En parallèle, des essais de cristallisation seront menés afin d‘obtenir des cristaux de complexe protéine/ADN pour des études de cristallographie macromoléculaire. Le projet permettra d’obtenir des informations originales sur l’architecture des homodimères de GR et sur les mécanismes moléculaires du cross-talk entre GR and ses partenaires. Ces études structure-fonction pourront à terme permettre le développement de nouvelles stratégies dans le traitement des maladies inflammatoires et faire avancer notre connaissance des mécanismes de de la transcription chez les eucaryotes.