Stage Master

Etude structurale de complexes de réparation de l’ADN par excision-resynthèse de nucléotides.

Mots-clés : hélicases, assemblages multi-protéiques, biologie structurale

Contexte : L’ADN est fréquemment exposé à l’action d’évènements génotoxiques, que ce soit par des agents exogènes comme les radiations ionisantes, des molécules mutagènes ou par le métabolisme cellulaire. Différentes mécanismes cellulaires permettent l’élimination et la réparation de ces lésions. Nous travaillons sur la voie de réparation par excision-resynthèse des nucléotides (NER), plus précisément sur le facteur TFIIH, un complexe multi-protéique composé de 10 sous-unités impliqué non seulement dans la voie NER mais également dans l’initiation de la transcription et sa régulation. Impliqué dans de nombreuses voies métaboliques, il interagit avec de multiples partenaires dont les acteurs de la transcription basale et activée ainsi que des facteurs de réparation de la voie NER dont le complexe de reconnaissance de la lésion XPC/HR23B ou l’endonucléase XPG.

Projet : Les travaux se focaliseront sur l’étude du complexe TFIIH/XPG composé des 10 sous-unités du facteur TFIIH associé à l’endonuclease XPG. Un premier volet sera consacré à optimiser la préparation du complexe TFIIH et à la production d’XPG. Dans une seconde phase des approches biochimiques et biophysiques seront utilisées pour étudier l’association entre les deux facteurs NER et caractériser le complexe en vue d’études structurales par cryo-microscopie électronique. Ce sujet est particulièrement adapté à un(e) étudiant(e) désirant poursuivre en thèse. L

Techniques: Production de complexes multi-protéiques (purification de protéines recombinantes - système d’expression baculovirus - et de complexes endogènes – utilisation de lignées génétiquement modifiées -). Etude de protéines/complexes par des méthodes biochimiques (pull down assays, tests ATPase et hélicase…), biophysiques (ultracentrifugation analytique, spectrométrie de masse) et structurales (microscopie électronique).